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微滴式數(shù)字PCR的技術(shù)特點介紹與應(yīng)用

點擊次數(shù):1125 更新時間:2025-01-06
  微滴式數(shù)字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)主要是通過對PCR反應(yīng)體系進行液相的有限稀釋,將一個體系分割為數(shù)萬個以上皮升級的微滴。每個微滴即一個獨立的反應(yīng)單元,每個反應(yīng)單元所含的DNA模板分子個數(shù)符合泊松分布數(shù)學(xué)模型。最后,通過測定每個反應(yīng)單元的熒光信號并結(jié)合泊松分布,可以計算出測定樣本的絕對拷貝數(shù)。
 
  微滴式數(shù)字PCR技術(shù)特點:
 
  高通量:微滴式數(shù)字PCR儀能夠同時處理多個樣品,每個樣品又被分割成成千上萬個微滴進行反應(yīng),從而實現(xiàn)了高通量的基因分析。
 
  高靈敏度:該技術(shù)能夠識別并放大非常低濃度的靶標核酸,即使樣本中病毒的含量極低,也可以通過這一技術(shù)進行有效檢測。這種高靈敏度使其成為檢測低豐度樣本的理想工具。
 
  絕對定量能力:微滴式數(shù)字PCR不依賴內(nèi)參基因或標準曲線進行定量分析,而是直接計算每個微滴中陽性反應(yīng)的比例,從而提供樣本中靶標分子的絕對數(shù)量。這簡化了定量分析過程,減少了潛在的誤差,保障了數(shù)據(jù)的精確性。
 
  減少干擾,提高一致性:由于每個微滴是一個獨立的反應(yīng)單元,這一設(shè)計有效減少了PCR抑制劑的影響,并防止了不同核酸分子擴增產(chǎn)物之間的相互干擾。因此,微滴式數(shù)字PCR的結(jié)果一致性和重復(fù)性較高,是確保數(shù)據(jù)可靠性的有效技術(shù)手段。
 
  應(yīng)用領(lǐng)域:
 
  疾病相關(guān)分子標記物檢測:微滴式數(shù)字PCR儀可用于檢測與疾病相關(guān)的分子標記物,如腫瘤標志物、遺傳病相關(guān)基因等。
 
  稀有突變序列檢測:該技術(shù)能夠準確檢測樣本中含量極低的稀有突變序列,為遺傳病診斷、腫瘤早期篩查等提供有力支持。
 
  病原微生物檢測:微滴式數(shù)字PCR儀可用于檢測各種病原微生物,如病毒、細菌、真菌等,為感染性疾病的診斷和治療提供重要依據(jù)。
 
  食品安全及轉(zhuǎn)基因成分檢測:該技術(shù)可用于檢測食品中的轉(zhuǎn)基因成分、農(nóng)藥殘留、添加劑等有害物質(zhì),確保食品的安全性和合規(guī)性。
 
  拷貝數(shù)變異遺傳分析:微滴式數(shù)字PCR儀可用于分析基因拷貝數(shù)變異,為遺傳病研究、基因治療等提供重要信息。
 
  基因表達分析:該技術(shù)可用于研究基因在不同條件下的表達水平,為基因功能研究、藥物篩選等提供有力支持。
 
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